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“黑膠蟲(chóng)”污染解決方案

    黑膠蟲(chóng)”是近十幾年才發(fā)現的一種細胞污染物,“黑膠蟲(chóng)”的分類(lèi)目前尚無(wú)鑒定確認。

“黑膠蟲(chóng)”可寄生于動(dòng)物細胞,也可以生存于培養基中,依靠細胞和培養基中的營(yíng)養為生,并隨細胞傳代而傳代?!昂谀z蟲(chóng)”與細胞競爭性生長(cháng),開(kāi)始時(shí)對細胞并沒(méi)有什么影響,但當黑膠蟲(chóng)的數量多到一定程度的時(shí)候, 細胞生長(cháng)就會(huì )受到影響直至死亡,嚴重影響了科研活動(dòng)的開(kāi)展和進(jìn)行。所以“黑膠蟲(chóng)”的污染常在培養條件改變、細胞接種密度降低、細胞狀態(tài)不佳時(shí)顯現并使實(shí)驗中斷,尤其在凍存細胞復蘇時(shí)可造成大量細胞死亡。

目前比較公認的觀(guān)點(diǎn)認為“黑膠蟲(chóng)”是一種微生物,增殖緩慢但對細胞有損害,數量達到一定程度可引起細胞死亡,其來(lái)源可能是細胞本身的污染或從動(dòng)物取材時(shí)污染造成的。該污染在全世界細胞實(shí)驗室中普遍存在,解決該問(wèn)題是一個(gè)世界性難題。

關(guān)于是什么問(wèn)題的討論

A. 玻璃培養瓶中的類(lèi)似氧化硅的東西(曾經(jīng)有文獻報道過(guò))

B. 據說(shuō)這是黑膠蟲(chóng),又有人說(shuō)是原生動(dòng)物,好像也沒(méi)個(gè)統一的說(shuō)法

C. 據病毒所和軍科院鑒定是一種寄生于牛血清內的一種原蟲(chóng),似乎和草履蟲(chóng)和變形蟲(chóng)有類(lèi)似之處,然而由于課題經(jīng)費不夠而不能繼續進(jìn)行下去。

D. 有人說(shuō)是納米級的細菌

其他的特點(diǎn)

(1)形態(tài)上有些像細菌,直徑約在0.5~1微米,

(2) 在400X倒置顯微鏡小,有典型的布朗運動(dòng)(不規則的原地小距離抖動(dòng))。

(3) 細胞內好像也有人存在

(4) 但并不引起培養液混濁

(5) 時(shí)間稍長(cháng),細胞狀態(tài)明顯惡化,最后死亡

大家的處理:

1.換好一點(diǎn)的血清(我覺(jué)著(zhù)和血清的關(guān)系不大)。

2.如果是貼壁細胞的話(huà),可用無(wú)菌的PBS洗幾次,可一定程度上緩解。若是懸浮的話(huà),就不太好處理啦,可以向其中少加一點(diǎn)滋養細胞(從小鼠腹腔內取得巨噬細胞,這種細胞不分裂,過(guò)一陣就死掉了,做抗體雜交瘤融合的同志肯定知道)。加滋養細胞對有黑膠蟲(chóng)的剛復蘇的細胞很有效!還有就是實(shí)驗環(huán)境要注意好,保持細胞間整個(gè)環(huán)境的潔凈度。

3.換用進(jìn)口的一次性塑料培養瓶。

4.建議清理無(wú)菌室所有物品,重新滅菌,用KMnO4熏蒸,按首次使用無(wú)菌室做,細胞重新復蘇。

5. 在換液前先加入生理鹽水并輕輕拍打,沖洗干凈后再加入培養液,堅持天天洗,傳代時(shí)加生理鹽水再離心一次,接種密度稍大一些,一段時(shí)間后,蟲(chóng)子就會(huì )大大減少,對細胞的生長(cháng)也不會(huì )有大的影響。

6.有材料稱(chēng)minocycline具有一定的作用,可以和換液結合起來(lái)使用。

在細胞培養實(shí)驗中,人們遇到的黒膠蟲(chóng)并不都是一樣的,有像細菌的、有像支原體的、有像原蟲(chóng)的、有像真菌的,還有像細胞碎片的。在國內各實(shí)驗室的器材條件參差不齊,而且實(shí)驗人員的操作質(zhì)量也不盡相同,同一種現象也可能有些許差異,當用描述出來(lái)的現象的差異可能變大也可能變小。所以很多人看到細胞被細菌污染了,不好處理,而且描述出來(lái)的現象和流傳的黑膠蟲(chóng)類(lèi)似,就會(huì )把培養失敗的原因歸結到無(wú)法處理的黒膠蟲(chóng)污染,甚至可能說(shuō)它發(fā)現的是真正的黑膠蟲(chóng)。這樣的事情多了,黑膠蟲(chóng)就會(huì )人為的變種,像什么的都有。黑膠蟲(chóng)是否存在,還有待于科學(xué)的發(fā)展。但有一點(diǎn)可以肯定的,大部分人發(fā)現的“黒膠蟲(chóng)”并不是真正那個(gè)未知的黒膠蟲(chóng),而是不很常見(jiàn)的細菌、真菌、原蟲(chóng)等微生物污染。

森貝伽-Biochannel 為您提供了以下幾種產(chǎn)品來(lái)解決問(wèn)題:

1、青霉素-鏈霉素-兩性霉素B溶液(100×) BC-CE-012

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兩性霉素B(Amphotericin B),為多烯類(lèi)抗真菌藥物。對本品敏感的真菌有新型隱球菌、皮炎芽生菌、組織胞漿菌、球孢子菌屬、孢子絲菌屬、念珠菌屬等。

2、鹽酸環(huán)丙沙星溶液(20mg/mL) BC-CE-014

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環(huán)丙沙星(Ciprofloxacin)屬于一種高效廣譜抗生素,CAS號為85721-33-1,分子量為331.35。環(huán)丙沙星抑菌原理在于抑制細菌DNA解旋酶,阻止細菌復制,所以快速降低細菌繁殖,是殺菌型抗菌藥。環(huán)丙沙星作用方式特殊,除喹諾酮類(lèi)外,與其它任何抗生素不同。因此,環(huán)丙沙星對青霉素類(lèi),頭孢菌素類(lèi),氨基糖甙類(lèi)和四環(huán)素類(lèi)耐藥菌珠均顯較高抗菌能力。

3、支原體清除試劑 BC-CE-019-10mL

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成分:分別是大環(huán)內酯類(lèi)抗生素和四環(huán)素類(lèi)衍生物。



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